發(fā)布時(shí)間： 2022-03-10 點(diǎn)擊次數(shù)： 1390次
ATCC細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)有形態(tài)計(jì)數(shù)法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法，MTT是一種噻唑鹽，化學(xué)名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，水溶液為黃橙色。小鼠脾細(xì)胞受到ConA作用后發(fā)生增殖活化，其胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶活性相應(yīng)升高，MTT作為其底物參與反應(yīng)，形成藍(lán)色的甲臜（Formazan）顆粒沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍，經(jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍(lán)色溶液，可用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)物的OD值，測(cè)定波長(zhǎng)570nm，根據(jù)OD值的大小計(jì)算反應(yīng)體系中細(xì)胞增殖程度。
ATCC細(xì)胞觀察培養(yǎng)時(shí)的主要事項(xiàng)說(shuō)明：
1.肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，再借助顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X，200X各一張），這樣做可方便后期的對(duì)比。
2.用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要經(jīng)過(guò)殺菌處理）。
3.嚴(yán)格按照在無(wú)菌環(huán)境下操作的原則，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（要換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
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